H2A組蛋白家族成員X（通?？s寫(xiě)為H2AX）是由H2AFX基因編碼的一種組蛋白。一個(gè)重要的磷酸化形式是γH2AX（S139），它在雙鏈斷裂出現(xiàn)時(shí)形成。H2AX在絲安酸139上變得磷酸化，然后被稱為γH2AX，作為DNA雙鏈斷裂（DSB）的反應(yīng)。

【產(chǎn)品用途】：本試劑盒僅供科研使用，定量檢測(cè)細(xì)胞液、體液、組織、血清、血漿等標(biāo)本中人磷酸化組蛋白(γH2AX)的含量。凡訂購(gòu)我司任意一款試劑盒均享受免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，歡迎咨詢、訂購(gòu)！

檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗原，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人磷酸化組蛋白γ-H2AX（γ-H2AX）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

人磷酸化組蛋白(γH2AX)科研ELISA試劑盒組成：（檢測(cè)范圍請(qǐng)參考說(shuō)明書(shū)）

注意：使用前請(qǐng)檢查試劑盒中試劑的標(biāo)簽和數(shù)量與表格是否一致。

實(shí)驗(yàn)需要但未提供的材料及耗材：

1、酶標(biāo)儀（建議儀器使用前提前預(yù)熱）

2、精密移液器、吸頭、加樣槽

3、蒸餾水或去離子水

4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、EP 管

7、無(wú)粉一次性乳膠手

人磷酸化組蛋白(γH2AX)科研ELISA試劑盒操作流程如下：

【平衡試劑盒至常溫】：取出實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所需板條，剩余半條用自封袋密封放回4攝氏度。

【加樣】：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。在樣本孔先加樣本10μl再加稀釋液40μl，（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
【加酶】：標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔總每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL空白孔除外。
【溫育】：用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃恒溫箱溫育60分鐘。
【配液】：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
【洗滌】：小心揭掉封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置60秒后甩去洗滌液，吸水紙上拍干。如此重復(fù)5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

【顯色】：每孔先加入底物溶液A 50μl，再加入底物溶液B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光孵育15分鐘。
【終止】：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
【測(cè)定】：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

我司供應(yīng)種屬種類齊全：人、大小鼠、豬、雞、犬、猴、牛羊、雞鴨、藥殘類、植物、羊、豚鼠等。質(zhì)量可靠、靈敏度高、效果穩(wěn)定、易保存。同時(shí)免費(fèi)提供產(chǎn)品最新報(bào)價(jià)、實(shí)驗(yàn)原理、產(chǎn)品用途及中英文說(shuō)明書(shū)。上海軒澤康生物擁有自己的實(shí)驗(yàn)室（上海）和技術(shù)團(tuán)隊(duì)，公司提供售前、售中、售后技術(shù)支持，為您解決實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到的問(wèn)題。想要了解更多實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)，歡迎咨詢!

ELISA試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題解答：

1. 問(wèn)：96T可以檢測(cè)多少個(gè)樣本？48T可以檢測(cè)多少個(gè)樣本？

軒澤康生物解答：96T ELISA試劑盒可檢測(cè)90個(gè)樣本，留6個(gè)孔做標(biāo)準(zhǔn)曲線；48T ELISA試劑盒可檢測(cè)42個(gè)樣本。

2. 問(wèn)：能否使用自己的稀釋液或者緩沖液？

軒澤康生物解答：每個(gè)試劑盒中都含有按配方配置的與特異性樣品種屬相配套的稀釋液，以確保待檢測(cè)的樣品被正確稀釋。具體請(qǐng)參看說(shuō)明書(shū)

3. 問(wèn)：ELISA檢測(cè)試劑盒空白對(duì)照是什么意思？

軒澤康生物答：不加樣本，不加稀釋液，不加酶標(biāo)試劑。其他都可以加。

4. 問(wèn)：我是按照實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行測(cè)定的但是沒(méi)有任何信號(hào)，這是為什么？

軒澤康生物答： 對(duì)于使用HRP底物的比色測(cè)定，終止液的加入會(huì)使底物變色。而說(shuō)明書(shū)推薦的波長(zhǎng)就是最適波長(zhǎng)。通過(guò)輕拍酶標(biāo)板的邊緣充分混合孔內(nèi)試劑，加入終止液時(shí)顏色由藍(lán)變黃。如果加終止液之前孔內(nèi)試劑沒(méi)有混合，則底物顏色變綠。也可能加入試劑的順序錯(cuò)誤。加入底物溶液以后不要清洗酶標(biāo)板，在連續(xù)稀釋時(shí)確定已經(jīng)加入標(biāo)準(zhǔn)品。如果底物系統(tǒng)中有兩個(gè)成份必須混合均勻。同時(shí)需確保酶標(biāo)儀的使用和操作正確。確定試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、樣品都正確配置并按照說(shuō)明滴加無(wú)誤。

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